502书库

第三节 血小板血型抗原抗体检测方法（第1页）

第三节血小板血型抗原抗体检测方法

血小板血型抗原和抗体无论在临床医学方面，还是在临床输血实践中，都有重要价值。血小板表面上有同族抗原。当一个人多次输入自己所缺少的血小板抗原，或妊娠时受胎儿血小板抗原的免疫刺激，就会产生抗血小板抗体，当再次输入该抗原的血小板时，血小板遭破坏不能得到疗效。因此，在临床开展检测血小板抗原和抗体工作十分重要。目前，检测血小板抗原、抗体以及交叉配血试验方法有多种。下面介绍几种具有操作简单、微量、不需要特殊器材和试剂等优点的方法。

一、血小板凝集试验

血小板凝集试验是检查血小板凝集的。血小板凝集素是在盐水中能显凝集的抗体，目前已知有3种：①只于37℃显凝集的免疫抗体，与之相应的抗原是血小板和白细胞共有的；②于18℃及37℃均显凝集的免疫抗体，与之相应的抗原只存在于血小板③在4℃和血小板凝集的冷抗体，这种抗体的临床意义不大。本节只介绍检查第1种抗体的方法。

（一）材料

1．病人血清。采血之后，置4℃12小时，再以2000rmin，离心10分钟分离血清，56℃灭

活30分钟。每毫升血清加0。1g硫酸钡，振摇5分钟，再以2000rmin，离心10分钟，取血清备用。

2．血小板悬液制备。血小板天然易聚集，应采取各种措施使其能均匀分布。用涂有硅剂的

注射器，采用与病人同ABO血型的正常人血液，置于硅化试管内。每9份血液加1份5%EDTA-2Na盐水，以1000rmin，离心6分钟，以硅化的吸管吸出上清液放在硅化试管内，以2000rmin，离心10分钟，弃去上清液；用5%EDTA-2Na盐水洗1次，继之以3%和1%EDTA-2Na各洗1次，每次以2000rmin，离心10分钟，最后加生理盐水，使成1×1012L，并加14体积AB型血清，置37℃加热5分钟，再置56℃16秒，最后置37℃备用。

3．AB型血清制备。须取自从未输过血的人，血清分离同病人血清。

&A-2Na生理盐水溶液。

5．硫酸钡粉。

（二）操作

1．取凹玻片预先加温至37℃，再分别标记为病人、阳性对照、阴性对照。

2．病人凹中置病原菌血清1滴，血小板悬液压泵滴。阳性对照凹中置已知的阳性血清1滴，血小板悬液1滴。阴性对照凹中置AB型血清1滴，血小板悬液1滴。

3．将玻片置于转盘器上，上面予加罩防蒸发，于37℃孵育箱中，转**30分钟，110rmin，幅度直径是4cm。最后用低倍显微镜观察结果。

（三）结果分析

阴性结果，血小板均匀颁布；阳性结果则有不同程度的凝集。应注意阴性对照是否符合。

二、血小板抗人球蛋白消耗试验

原理同白细胞抗人球蛋白消耗试验，有直接与间接两种方法，皆在4℃某些方面环境中进行操作。

（一）直接法

1．材料

（1）所用器皿用清洁液浸泡洗净；

&A生理盐水缓冲液，取磷酸氢二钠15。05g、磷酸二氢钾3。63g及EDTA33。00g，加生理盐水至10L，搅和混匀。

（3）抗人球蛋白血清须高效价1：512

（4）抗Rh（D）不完全抗体。

（5）血小板悬液制备：A。取受检者血液20ml，放入内有110体积的2%EDTA-2Na溶

液置于硅化试管中，摇匀，1000rmin，离心6分钟；b。吸取上层清液于另一试管中，2000rmin，离心10分钟浓缩血小板；c。弃去上清液，把余下之血小板用EDTA生理盐水缓冲液洗3次，每次2000rmin，离心10分钟，余下0。8ml。血小板最适浓度计数（8-9）×1012L。

2．操作