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第三节HLA抗原抗体检测（第1页）

第三节HLA抗原抗体检测

一、HLA抗原检查方法

HLA抗原是淋巴细胞膜上的一种抗原，现已能检出120多种特异性抗原。根据它们受控的遗传座位不同，可以分为A、B、C、D、DR、DQ、DP等多个系列。主要方法有三种：血清学方法、细胞学方法和DNA方法。

（一）血清学方法——微量淋巴细胞毒试验

微量淋巴细胞毒试验是由美国洛杉矶加州大学的保罗。泰萨奇教授（Dr。Paul。Terasaki）于1964年发明。1970年被美国国立卫生院确定为国际通用标准技术。

淋巴细胞具有HLA抗原，HLA细胞毒抗体（IgG和IgM）能够结合到带有相应抗原的淋巴细胞膜上，在补体的存在下，结合的补体能够在淋巴细胞膜上打孔，使细胞死亡。如果淋巴细胞不带有相应的抗原，则无此作用。通过染色的方法可以观察到，加入的染料可以进入死亡的细胞，使之着色，而活细胞不被着色。

目前，常用的染料有曙红（又称伊红）和荧光液（CFDA和EB）。在倒置显微镜下，活细胞不被曙红着色而成明亮色，细胞有很强的折光性，细胞体积不增大。死细胞能够被曙红着色，细胞呈现浅灰色，细胞体积略增大，无折光能力。如果使用荧光染色，在显微镜下活细胞呈绿色（CFDA与细胞膜结合呈现绿色），死细胞呈红色（EB可通过破损细胞膜进入细胞内与DNA结合，呈现红色）。

在T和B淋巴细胞膜上都存在HLA-A，B，C抗原。而检测DR和DQ抗原必须用B淋巴细胞。

结果判断的方法和计分标准

结果的判断是通过观察反应板孔内细胞死亡的比例，给出相应的计分。目前常用的计分标准如下表。在反应结果模棱两可时，即死亡比例占20%左右，要给予确切的计分是很困难的。NIH（美国国立卫生院）建议，只有在死亡细胞大于30%时才能作为弱阳性反应；大于50%时才能作为阳性反应。

法读数

注：＊指高于对照的死亡细胞百分数

（二）细胞学分型当两个无关个体的淋巴

细胞在体外混合培养，可以相互刺激，使淋巴细胞向母细胞转化，产生分裂增殖及混合淋巴细胞反应，这主要是因为HLA-D抗原不同引起的，当我们知道其中一种淋巴细胞的抗原，如果淋巴细胞不发生增殖，说明两种淋巴细胞同型，反之，则不同型。这也可以用于体外检测器官移植供受者之间是否会发生排异反应。细胞学分型主要有三种方法：混合淋巴细胞反应、预处理淋巴细胞反应和纯合细胞分型技术。

1。混合淋巴细胞培养（mixedlymphocyteculture，MLC）分为双向MLC和单向MLC方法。

在双向MLC试验中，双方细胞都有刺激作用和应答能力，而且HLA-D不配合程度越大，刺激增殖程度越强。在单向MLC中，用丝裂霉素C、照射等方法处理一方细胞，使其失去应答能力，保持刺激能力。一般是将已知HLA-D淋巴细胞，用丝裂霉素C、照射等方法处理，然后与未知的淋巴细胞，培养5～7天，加入放射性胸腺嘧啶，用放射性核素闪烁仪测定放射量。

2。预处理淋巴细胞培养（primedlymphog，PLT）

3。纯合细胞分型（homozygoustypiC）

（三）核酸检测方法（DNA方法）